În prezent sisteme computerizate dezvoltate, conducând automat izolarea bacteriilor din probele de testatși determinarea sensibilității acestora la diferite medicamente. Principalul lor avantaj este eliberarea personalului de laborator bacteriologic dintr-un volum mare de cercetări de rutină și standardizarea clară a rezultatelor obținute.

Utilizarea pe scară largă a acestor dispozitive în practica casnică limitează costul acestora. Dintre metodele mai accesibile, cele mai răspândite sunt Sistemul AlamarŞi E-test, combinând avantajele metodei de diluare în serie cu cea a discului.

Noi metode pentru determinarea sensibilității bacteriilor la chimioterapie. Sisteme automate de înregistrare a rezultatelor metodei de diluare în serie">

Sisteme automate de înregistrare a rezultatelor metodei de diluare în serie(de exemplu, Baxter MicroScan AutoSCAN-4) - sisteme automate de incubare cu fotometre încorporate care înregistrează nefelometric creșterea bacteriilor sau absența acesteia la 24 de ore după introducerea microorganismelor în godeurile micropanourilor. Principiul de funcționare se bazează pe luarea în considerare a diferenței de densitate optică a mediului în godeurile în care există creștere bacteriană și în godeurile în care nu există creștere. În prezent, au fost dezvoltate dispozitive (de exemplu, VITEK) care oferă rezultate în 4-10 ore.

Sistemul Alamar este un panou cu godeuri, fiecare conținând discuri de hârtie de filtru care conțin diferite concentrații de agenți antimicrobieni și impregnate cu indicatorul Alamar Blue. După introducerea bacteriilor în puț, discul devine albastru și, odată cu creșterea lor ulterioară, culoarea sa se schimbă în roz. Ordinea de plasare a discurilor în godeuri corespunde diluțiilor în serie duble ale medicamentului. Ultimul godeu cu un disc albastru, precedând godeurile cu discuri rozalii, corespunde MIC al medicamentului.

E-test[din engleză elipsă, elipsă, deoarece în prezența sensibilității se formează o zonă de inhibare a creșterii în formă eliptică] - o modificare a metodei discului, dar în locul acesteia din urmă se folosesc benzi de hârtie de filtru impregnate cu diferite concentrații de medicamente, fiecare dintre aceste zone are marcaje adecvate. Benzile sunt așezate pe suprafața agarului. Dacă bacteriile sunt sensibile la acțiunea medicamentului, se formează o zonă elipsoidală în jurul zonelor benzii care conțin concentrațiile sale inhibitoare. Forma sa se datorează acțiunii mai multor concentrații de medicament simultan. MIC corespunde secțiunii benzii unde este traversată de limita zonei de inhibare a creșterii.

E-test) este o metodă bine stabilită pentru testarea sensibilității la antibiotice în laboratoarele din întreaga lume. Este utilizat pe scară largă în studiile de rezistență atât în ​​clinicile de diagnostic, cât și în cele de testare. Testul este o metodă cantitativă de determinare MIC medicamente antifungice și antibacteriene pentru agenții infecțioși, inclusiv cei septici, care este deosebit de important pentru pacienții grav bolnavi. Această metodă are în prezent peste 100 de antibiotice pentru a testa o serie de bacterii aerobe și organisme pretențioase, cum ar fi pneumococi, Haemophilus influenzae, H. pylori, meningococi, gonococi, anaerobi, ciuperci și micobacterii. E-test face posibilă utilizare rațională antibiotice care oferă cel mai bun rezultat pentru pacienți, precum și pentru a ajusta regimul de tratament după prescrierea empirică a medicamentelor. Testul este extrem de important pentru determinarea dozei de antibiotic la pacienții cu o localizare topografic dificil de atins a sursei de infecție (ex. endocardită), cu unele infecții nosocomiale, infecții cronice și la pacienții imunodeprimați.

E-test- tehnologie unica patentata. Principiul său este că diluțiile succesive ale antibioticului sunt aplicate pe o bandă de test din plastic de la mai mică la mai mare și vă permite să determinați cu exactitate, din cel puțin 15 diluții, activitatea antimicrobiană a agenților bacterieni, atât capricioase, cât și nu.

Procedura de testare este simplă: o bandă cu un reactiv este plasată pe suprafața unui agar inoculat dintr-o diluție standard. După incubare, rezultatul este citit folosind o scară de diluție aplicată pe placă la intersecția zonei de inhibare a creșterii, sub forma unei elipse, cu banda de testare.

E-test are o serie de avantaje în monitorizarea rezistenței, deoarece conține un gradient de concentrație care poate prezenta cele mai mici modificări ale sensibilității. Lățimea gradientului de concentrație al acestui test acoperă variațiile în mod sensibil ity a microorganismelor şi determină atât scăzut cât şi niveluri înalte rezistenţă.

Acesta este cel mai sensibil test disponibil astăzi. E-test este o macrometodă care poate fi ușor implementată în laborator pentru a determina sensibilitatea. În epoca descoperirii unor infecții tot mai noi și a creșterii rezistenței microorganismelor la medicamentele antibacteriene, E-test recunoscută la nivel mondial ca o inovație majoră în determinarea activității antimicrobiene.

Catalogul Biomerye 2013 de la paginile 33 - 36 conține o listă completă de teste electronice (100 de articole):

• Antibacterian
• Antifungic
• Antituberculoză
• Pentru a determina rezistența la mai multe medicamente

	Nume	Pisică. Nu.
	antifungic	20306
		19364
		20307
		20457
		21040
		21053
		21055
		19361
		19362
	Pachetul din folie contine un cartus de spuma cu 30 de benzi si un desicant; A se pastra la 2-8°C sau in camera controlata. t°С	19363
	ambalajul este un blister (ambalaj secționat din plastic) format din 10 celule, fiecare conținând 3 benzi (antibacteriene). Depozitare la -20°C	19365
	Ambalajul este un blister (ambalaj secționat din plastic) format din 10 celule, fiecare celulă conține 3 benzi (antibacteriene). Depozitare la -20°C	19366
	Ambalajul este un blister (ambalaj secționat din plastic), format din 10 celule, fiecare conținând 3 benzi (antibacteriene). Depozitare la -20°C	19359
	Pachetul din folie contine un cartus de spuma cu 30 de benzi si un desicant; A se pastra la 2-8°C sau in camera controlata. t°С	19371
	Pachetul din folie contine un cartus de spuma cu 30 de benzi si un desicant; A se pastra la 2-8°C sau in camera controlata. t°С	19375
	Pachetul din folie contine un cartus de spuma cu 30 de benzi si un desicant; A se pastra la 2-8°C sau in camera controlata. t°С	19374
	Pachetul din folie contine un cartus de spuma cu 30 de benzi si un desicant; A se pastra la 2-8°C sau in camera controlata. t°С	19373
	Ambalajul este un blister (ambalaj secționat din plastic) de 10 celule, fiecare celulă conține 3 benzi (antibacteriene). Depozitare la -20°C	19372
	Ambalajul este un blister (ambalaj secționat din plastic) de 10 celule, fiecare celulă conține 3 benzi (antibacteriene). Depozitare la -20°C	19370
	Pachetul din folie contine un cartus de spuma cu 30 de benzi si un desicant; depozitare 2-8°C sau în încăpere controlată. t°С	19360

Metoda difuziei pe disc

Nu mai mult de 6 discuri impregnate cu antibiotice se așează pe suprafața unui mediu nutritiv dens însămânțat pe un gazon continuu cu cultura de testare, la o distanță de cel puțin 2 cm unul de celălalt. Rezultatele se înregistrează după 18-24 de ore de incubare într-un termostat în funcție de diametrul zonei fără creștere din jurul discurilor cu antibiotice. Prezența creșterii în jurul discului indică insensibilitatea acestui microbi la antibiotic. Pentru interpretarea rezultatelor se folosesc tabele speciale.

Figura 1. Determinarea sensibilității

microorganisme folosind metoda difuziei pe disc:

1 – microorganism sensibil la un antibiotic;

2 – microorganism moderat rezistent la un antibiotic;

3 – microorganism stabil la un antibiotic.

Metoda E-test

Principiul metodei. Determinarea sensibilității unui microorganism se realizează în mod similar testării prin metoda difuziei pe disc. Diferența este că în loc de un disc de antibiotic se folosește o bandă de testare E, care conține un gradient de concentrații de antibiotic de la maxim la minim. La intersecția zonei elipsoidale de inhibare a creșterii cu banda de testare E, se obține valoarea concentrației minime inhibitorii (MIC).

Figura 2. Determinarea sensibilității microorganismelor folosind teste E

Metoda de diluare în serie în mediu bulion

Se prepară diluții duble ale medicamentului antibacterian în eprubete care conțin 1 ml bulion Mueller-Hinton, de exemplu 100 µg/ml – 1, 50 µg/ml – 2, 25 µg/ml – 3, 12,5 µg/ml – 4. , etc. Apoi se adaugă în fiecare tub 0,1 ml din suspensia bacteriană testată. Totodată, se administrează controlul creșterii (1 ml bulion Mueller-Hinton și 0,1 ml suspensie bacteriană). Culturile sunt incubate la 37°C timp de 18-24 ore, după care se notează rezultatele. Absența turbidității în mediu indică o întârziere a creșterii bacteriene în prezența unei concentrații date de medicament.

Figura 3. Determinarea valorii CMI prin diluare în mediu nutritiv lichid

Concentrația minimă inhibitorie (MIC) este cea mai mică concentrație a unui antibiotic (în μg/ml sau mg/l) care inhibă complet creșterea bacteriană vizibilă in vitro.

2 Determinarea sensibilității diferitelor tulpini de stafilococi la antibiotice folosind metoda discului standard

Cultura studiată este sensibilă la ________________________________________________________________

moderat rezistent la ________________________________________________________________________,

rezistent la _________________________________________________________________________________.

3 Determinarea concentrației minime inhibitorii (MIC) a penicilinei prin metoda diluțiilor în serie.

Concluzie: CMI a penicilinei pentru tulpina studiată este _____________________________________

Avantajele metodei:________________________________________________________________________________

Dezavantajele metodei:________________________________________________________________________________

4 Identificarea și înregistrarea acțiunii antagoniste diferite tipuri bacterii.

Un microb antagonist și tulpinile de testare perpendiculare pe acesta sunt inoculate cu o dungă de-a lungul diametrului pe o placă cu MPA. Rezultatele se înregistrează la o zi după însămânțare. Prezența și gradul de acțiune antagonistă sunt determinate de mărimea zonelor de inhibare a creșterii din culturile de testat.

Semănat de linie _________________________________

Concluzie: cel mai mare efect antagonist a fost detectat pentru tulpinile de testat (specificați specia) _____________________________________________________________________________________________

LECȚIA Nr. 8

SUBIECT: LECȚIA FINALĂ PE TEMA: „ETAPELE ISTORICE ÎN DEZVOLTAREA MICROBIOLOGIEI, MORFOLOGIEI, FIZIOLOGIEI ȘI GENETICII MICROORGANISMELOR.”

Formele și dimensiunile bacteriilor adevărate. Caracteristicile formelor sferice, în formă de tijă și întortocheate ale bacteriilor adevărate.

Structura bacteriilor. Principalele diferențe dintre o celulă procariotă și o celulă eucariotă.

Peretele celular al bacteriilor gram-pozitive și gram-negative.

Tipuri de preparate microscopice. Tehnica de preparare a preparatelor fixe.

Tehnica microscopiei într-un microscop cu lumină.

Studiul morfologiei microorganismelor la microscop electronic.

Proprietățile tintoriale ale microbilor. Coloranți. Metode simple de colorare a preparatelor fixe.

Principii de clasificare a procariotelor patogene (Burgee, 2001).

Dispozitive de protecție la microorganisme.

Spori, stadii și condiții de formare a sporilor, semnificație biologică.

Capsulele bacteriene, semnificația lor.

Flagelii, structura lor. Cilia. Băutură sexuală.

Metode complexe de vopsire. Tehnici de colorare Gram, Ziehl-Neelsen, Burri-Gins, Neisser.

Metode de studiere a microorganismelor în stare de viață. Testul CON. Principiul metodei.

Spirochetele.

Poziția și morfologia sistematică a spirochetelor. Caracteristici ale ultrastructurii și compoziției chimice. Metode de cercetare.

Actinomicete, morfologie, ultrastructură, compoziție chimică. Specii patogene. Rolul actinomicetelor în natură și medicină. Metode de detectare.

Taxonomia chlamydia. Morfologie, structură, metode de detectare. Ciclul de dezvoltare a Chlamydia.

Rickettsia, morfologie, ultrastructură, compoziție chimică. Specii patogene.

Micoplasme.

Clasificare. Filogeneza. Metode de detectare.

Cerințele energetice ale bacteriilor. Modalități de obținere a energiei din autotrofe (fotosinteză, chimiosinteză). Surse și modalități de obținere a energiei în chemoorganotrofi.

Tipuri aerobe și anaerobe de oxidare biologică în bacterii. Bacteriile aerobe, anaerobe, anaerobe facultative și microaerofile. Metode de creare a condițiilor anaerobe.

Obiective, etape, avantaje și dezavantaje ale metodei de cercetare bacteriologică (culturală).

Creșterea și reproducerea microorganismelor. Metode de reproducere. Fisiune binară (simple), mecanism. Reproducerea populațiilor bacteriene.

Principii și metode de cultivare a bacteriilor.

Nevoile nutriționale ale microbilor.

Medii nutritive pentru cultivarea bacteriilor.

Cerințe pentru mediile nutritive.

Clasificarea mediilor nutritive.

Condiții și tehnici de cultivare a bacteriilor.

Tehnica de însămânțare pe medii nutritive.

Modele și natura creșterii bacteriene pe medii nutritive solide și lichide.

Metode de izolare a culturilor pure de bacterii aerobe și anaerobe.

Proprietățile microorganismelor utilizate pentru identificarea culturilor izolate.

Enzime bacteriene, clasificare. Metode de studiere a proprietăților biochimice ale microorganismelor. Utilizarea practică a activității biochimice în identificarea bacteriilor

Determinarea proprietăților zaharolitice, compoziția mediilor Hiss; determinarea proprietăților proteolitice, determinarea activității catalazei și oxidazei.

Principiul de funcționare și caracteristicile utilizării dispozitivelor de identificare automată a culturilor bacteriene (hemocultivator, analizor automat). Caracteristici ale cultivării rickettsiei și chlamydiei. Bacteriofagi (fagi). Istoria descoperirii. Morfologia, caracteristicile structurale, compoziția chimică și proprietățile fagilor.

Fagi virulenți. Fazele de interacțiune cu o celulă bacteriană. Rezultatele interacțiunii dintre fag și celulă. Fagi temperati. profag.

Fenomenul de lizogenie. Conversia fagilor.

Variabilitatea microbiană. Modificări ale bacteriilor, semnificație, manifestări și proprietăți principale (natura neereditară, adaptabilitate, frecvența mare a modificărilor directe și inverse, mulți factori inductori).

Variabilitatea genotipică. Mutații și clasificarea lor.

Mutageni. Manifestări fenotipice ale mutațiilor. Soarta mutanților. Disocierea în bacterii.

Influența selecției. Sistem de reparare a daunelor genomului.

Variabilitatea recombinării. Mecanisme de formare a genomilor combinați. Frecvența modificărilor caracteristicilor individuale.

Transformare, transducție, conjugare.

Semnificația practică a cunoștințelor despre genetica microbilor.

Principiile cartografierii genetice.

Metode de analiză genetică (hibridare moleculară, reacție în lanț a polimerazei, blotting, secvențiere).

Conceptul de inginerie genetică și utilizarea metodelor sale în microbiologie și biotehnologie.

Producerea și utilizarea de vaccinuri și citokine modificate genetic.

Măsuri antimicrobiene. Influența factorilor de mediu asupra microbilor. Acțiunea factorilor fizici (temperatură, uscare, radiații, ultrasunete, presiune osmotică). Acțiunea factorilor chimici.

Scopuri, metode, mijloace și obiecte de sterilizare și dezinfecție în practica medicală și microbiologică. Controlul calității dezinfectării. Controlul sterilizării și sterilității. Metode de realizare.

Antiseptic. Definiţie. Agenți antiseptici, cerințe, origine, proprietăți, grupe, mecanisme de acțiune asupra microbilor.

Tipuri de antiseptice. Antiseptice terapeutice. Antiseptice preventive.

Medicamente pentru chimioterapie. Proprietăți. Principalele grupe de medicamente pentru chimioterapie. Mecanisme de acțiune asupra bacteriilor. Conceptul de selectivitate și „ținte” acțiunii.9

SUBIECT: ECOLOGIA BACTERIILOR. INFECŢIE. MICROORGANISME PATOGENE. TOXINE MICROBIENE. METODĂ BIOLOGICĂ (EXPERIMENTALĂ).

LISTA DE VERIFICARE

Microflora corpului uman . Microfloră umană normală (rezidentă). Microflora autohtonă și alohtonă, parietală și luminală.

Formarea și dezvoltarea microflorei normale. Funcțiile microflorei normale: antiinfecțioase, metabolice, imunobiologice, antitoxice.

Dismicrobiocenoza (disbacterioza), cauze, tipuri, principii de corectare.

Conceptul de infecție. Definiție, caracteristici generale. Diferențele dintre bolile infecțioase și bolile neinfecțioase.

Rolul microorganismului în procesul infecțios.

Doza infectioasa. Metode de infectare.

Poarta de intrare. Patogenitate și virulență. Controlul genetic al patogenității și virulenței. Factori care cresc și scad virulența microbilor.

Factori de patogenitate. Metode de determinare a virulenței, unități. Microorganisme patogene obligatorii și patogene condiționat.

Toxicitatea și toxicitatea microorganismelor. Endotoxine, proprietăți, producție, aplicare. Exotoxine, proprietăți, producție, unități de măsură. Tipuri de exotoxine, mecanism de acțiune. Rolul macroorganismului în dezvoltarea și evoluția bolilor infecțioase. Factori ereditari. Starea anatomică și fiziologică a corpului. Rolul condițiilor de viață în dezvoltarea și evoluția bolilor infecțioase. Factori naturali. Factori sociali.

Clasificarea proceselor infecțioase după severitate, natura agentului patogen, sursa de infecție, modul de transmitere a agentului patogen și mecanismul de infecție și prevalență. Clasificarea proceselor infecțioase în funcție de localizarea focarului microbian, durata cursului și frecvența infecției. Dinamica

proces infecțios

, caracteristicile sale. biologic (experimental).

metoda de cercetare , etape, evaluare. Animale de laborator..

Metode de infectare. LUCRĂRI DE LABORATOR

C) Efectuați o înregistrare a inoculării microflorei, pregătiți preparate din diferite tipuri de colonii, colorație Gram, microscop (în inoculări demonstrative).

Luarea în considerare a inoculării microflorei:

Microscopia preparatelor:

2 Evaluarea adezivitățiiE. coliprin capacitatea lor de a adsorbi la suprafata globulelor rosii

Metode de infectare. La suspensia eritrocitară se adaugă cultura de testare a microorganismelor. După incubare, frotiurile sunt pregătite, colorate și numărul mediu de bacterii adsorbite pe un globul roșu este determinat la microscop.

În acest caz, celulele roșii din sânge sunt utilizate ca o celulă model a unui microorganism susceptibil.

3 Determinarea enzimelor invazive la stafilococi

1. Plasmocoagulaza

Principiul metodei: Cultura de testat se adaugă într-o eprubetă care conține plasmă de sânge de iepure citrat. După incubarea într-un termostat, rezultatul este luat în considerare. Dacă rezultatul este pozitiv, plasma se coagulează (coagulează).

2.Fibrinolizina

Principiul metodei: Cultura de testat se adaugă într-o eprubetă cu fibrină (un cheag de sânge spălat de globule roșii). După incubarea într-un termostat, rezultatul este luat în considerare. Dacă rezultatul este pozitiv, cheagul se dizolvă.

3.Hialuronidază

Principiul metodei: Cultura testată se adaugă într-o eprubetă cu acid hialuronic (HA). După incubarea într-un termostat, se adaugă un reactiv care provoacă coagularea HAA și se ține cont de rezultat. Dacă rezultatul este pozitiv (din cauza defalcării HAA), nu se formează niciun cheag.

4.Lecitovitellaza (lecitinaza)

Principiul metodei: culturile izolate de stafilococ se inoculează pe agar cu sare de gălbenuș, care conține clorură de sodiu 7,5% și o suspensie de gălbenuș. Dacă rezultatul este pozitiv, se formează un halou curcubeu în jurul coloniilor de stafilococi virulenți din cauza descompunerii lecitinei conținute în gălbenușul unui ou de găină.

Concluzie: (enumerați enzimele de virulență ale fiecăreia dintre cele două tulpini studiate) ________________________________________________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________________________

Toxine bacteriene

Toxicitate ________________________________________________________________________________________________

Toxigenitate ________________________________________________________________________________________________

Endotoxina ________________________________________________________________________________________________

Șoc endotoxic ________________________________________________________________________________

Aplicarea practică a endotoxinelor:

Exotoxina ________________________________________________________________________________________________

Anatoxina ___________________________________________________________________________________________

Schema de obtinere a exotoxinei si a toxoidului.

1.____________________________________________________________________________________________

2.____________________________________________________________________________________________

4.____________________________________________________________________________________________

Utilizarea practică a toxoizilor:

1.____________________________________________________________________________________________

2.____________________________________________________________________________________________

3.____________________________________________________________________________________________

Etest® este o bandă de plastic inert acoperită cu un agent antimicrobian într-un gradient de concentrație de la minim la maxim, într-un interval echivalent cu 15 diluții de două ori. Pe cealaltă parte a benzii există o scară a concentrațiilor minime inhibitorii (MIC) corespunzătoare. Testele E vă permit să determinați concentrația minimă inhibitorie a unui medicament antimicrobian (metoda de difuzie cantitativă).
. Se inoculează o placă cu o cultură a microorganismului.
. Așezați benzi Etest® (până la 2 pe cupă standard cu diametrul de 90 mm sau până la 6 pe cupă cu diametrul de 180 mm).
. În timpul procesului de cultivare, în jurul benzii se va forma o zonă elipsoidală de inhibare a creșterii, care intersectează banda în punctul corespunzător MIC.
. Testele electronice au fost folosite de mai bine de 20 de ani.
. Peste 100 de medicamente antimicrobiene.
. Benzi pentru detectarea multirezistenței la medicamente.
. Determinarea sensibilității microorganismelor pretențioase, streptococilor, microorganismelor anaerobe, ciupercilor (inclusiv mucegaiurilor), mycobacterium tuberculosis etc.
. Formă de eliberare convenabilă: 30 sau 100 de bucăți, în ambalaj blister sau cartuș de spumă.